U kemiji razrjeđivanje je postupak smanjenja koncentracije tvari u otopini. Lančano razrjeđivanje je ponavljano razrjeđivanje otopine za brzo povećanje faktora razrjeđenja. Ovaj postupak se obično izvodi u eksperimentima koji zahtijevaju vrlo razrijeđene otopine s velikom preciznošću. Na primjer, eksperimenti koji uključuju krivulje koncentracije na logaritamskoj ljestvici ili eksperimenti za određivanje gustoće bakterija. Razrjeđenja lanaca široko se koriste u naučnim eksperimentima kao što su biokemija, mikrobiologija, farmakologija i fizika.
Korak
Metoda 1 od 2: Izvođenje osnovnog razrjeđivanja
Korak 1. Odredite odgovarajuću otopinu razrjeđivača
Vrlo je važno odrediti tekućinu koja će se koristiti za razrjeđivanje. Mnogi rastvori su topljivi u destiliranoj vodi, ali to nije uvijek slučaj. Ako razrjeđujete bakterije ili druge stanice, učinite to na podlozi za uzgoj. Odabrana tečnost će se koristiti za sva razblaživanja lanca.
Ako ste u nedoumici o tome koji razrjeđivač koristiti, potražite pomoć ili potražite na internetu. Potražite primjere drugih koji su radili slična razrjeđenja lanca
Korak 2. Pripremite nekoliko epruveta koje sadrže 9 mL razrjeđivača
Epruvete se koriste za prazna razrjeđenja. Prvo stavite nerazrijeđeni uzorak u prvu epruvetu, a zatim razrijedite uzastopno u sljedeće epruvete.
- Označite sve epruvete koje ste koristili prije početka razrjeđivanja kako se ne biste zbunili nakon početka eksperimenta.
- Svaka epruveta će se napuniti s 10 razrjeđenja, počevši od epruvete čija supstanca nije razrijeđena. Razrjeđenje u prvoj epruveti je 1:10, zatim 1: 100 u drugoj epruveti, 1: 1000 u trećoj itd. Odredite količinu razrjeđivanja koja se mora izvršiti unaprijed kako ne biste rasipali otopinu razrjeđivača.
Korak 3. Pripremite epruvetu koja sadrži najmanje 2 mL nerazrijeđenog rastvora
Minimalna količina otopine koja se mora razrijediti potrebna za izvođenje ovog razrjeđivanja lanca je 1 mL. Ako koristite samo 1 ml, neće ostati preostala nerazrijeđena otopina. Označite BLM za nerazrijeđene otopine.
Prije početka bilo kakvog razrjeđivanja dobro promiješajte rastvor
Korak 4. Izvršite prvo razrjeđivanje
Uzmite pipetom 1 mL nerazrijeđenog rastvora iz epruvete za BLM i stavite ga u epruvetu s oznakom 1:10 koja sadrži 9 mL razrjeđivača, a zatim dobro promiješajte. Sada postoji 1 mL nerazrijeđenog rastvora u 9 mL razrjeđivača. Tako je otopina razrijeđena faktorom razrjeđenja 10.
Korak 5. Izvedite drugo razrjeđivanje
Za drugo razblaživanje, uzmite 1 mL rastvora iz epruvete 1:10, a zatim ga stavite u epruvetu 1: 100 koja takođe sadrži 9 mL razblaživača. Pre nego što ga dodate u sledeću epruvetu, proverite da li je rastvor u cevi 1:10 potpuno izmešan. Ponovo provjerite je li razrjeđenje u epruveti 1: 100 potpuno pomiješano. Rastvor iz epruvete 1:10 razblažen je 10 puta u epruveti 1: 100.
Korak 6. Nastavite ovaj postupak za izvođenje dužih razrjeđenja lanca
Ovaj postupak se može ponoviti onoliko puta koliko je potrebno da se dobije željena koncentracija otopine. U eksperimentima koji koriste krivulje koncentracije, možete izvesti razrjeđivanje lanca kako biste proizveli brojne otopine s razrjeđenjima 1, 1:10, 1: 100, 1: 1.000.
Metoda 2 od 2: Izračunavanje faktora razrjeđenja i konačne koncentracije
Korak 1. Izračunajte omjer posljednjeg razrjeđenja u razrjeđenju lanca
Ukupni omjer razrjeđivanja može se odrediti množenjem faktora razrjeđenja od svakog koraka do posljednjeg. Matematička ilustracija je formulom Dt = D1 x D2 x D3 x… x D , Dt je ukupni faktor razrjeđenja i D je omjer razrjeđivača.
- Na primjer, recimo da razrijedite 1:10 4 puta. Uključite faktor razblaživača u formulu: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Faktor razrjeđivača u četvrtoj epruveti u ovom razrjeđenju lanca je 1: 10.000. Koncentracija tvari nakon razrjeđivanja je 10.000 puta manja nego prije razrjeđivanja.
Korak 2. Odredite koncentraciju otopine nakon razrjeđivanja
Da biste odredili konačnu koncentraciju otopine nakon razrjeđivanja lanca, morate znati njenu početnu koncentraciju. Formula je Ckraj = Cpočetak/D, Ckraj je konačna koncentracija razrijeđene otopine, Cpočetak je početna koncentracija izvorne otopine, a D je unaprijed određeni omjer razrjeđivanja.
- Na primjer: Ako počnete s ćelijskim rastvorom čija je koncentracija 1.000.000 ćelija po ml, a omjer razrjeđenja 1.000, koja je konačna koncentracija razrijeđenog uzorka?
-
Koristeći formulu:
- Ckraj = Cpočetak/D
- Ckraj = 1.000.000/1.000
- Ckraj = 1000 ćelija po ml.
Korak 3. Uvjerite se da su sve jedinice iste
Prilikom izvođenja bilo kakvog izračuna, provjerite jesu li jedinice uvijek iste na kraju izračuna. Ako je početna jedinica ćelija po mL, pobrinite se da jedinice ostanu iste na kraju izračuna. Ako je početna koncentracija dijelovi na milijun (bpd), tada konačna koncentracija također mora biti u jedinicama bpj.
