Postoji mnogo načina za mjerenje rasta bakterija, a jedan način je složeniji od drugog. Iako se ponekad mora zanemariti dosljednost mjerenja, najlakši način je dovoljan da se točno izmjeri rast bakterija, pa se često koristi. Najčešće korištene metode su praćenje i brojanje bakterija, mjerenje suhe ili vlažne mase, te mjerenje zamućenosti/zamućenosti. Laboratorija vaše škole trebala bi imati alate i opremu potrebnu za izvođenje barem jednog od ovih eksperimenata.
Korak
Metoda 1 od 3: Praćenje bakterija uživo
Korak 1. Pripremite sastojke
Postoje mnogi posebni alati koje je potrebno pripremiti i koji možda nisu dostupni u biološkoj laboratoriji. Prije izvođenja eksperimenta pripremite svu opremu i spremnike kako ne bi došlo do problema tijekom procesa. Morat ćete odmah znati svaki sastojak koji se koristi i osnovne uvjete ovog eksperimenta.
- Pripremite komoru za brojanje. Ima ugrađenu komoru, staklo za mikroskop i mikroskop pa je lako postaviti i koristiti. Možete ga kupiti u laboratoriju ili u prodavnici školskog pribora. Ovaj alat trebao bi imati upute koje će vas voditi kroz cijeli proces.
- Pripremite šolju za sipanje ili razmazanu šolju. Oba ova spremnika omogućuju vam praćenje bakterija iznutra.
- Kultura je izraz koji se koristi za opisivanje rasta organizama u eksperimentu.
- Juha je tekući medij u kojem kultura raste.
Korak 2. Upotrijebite metodu izlijevanja ili širenja ploče
Bakterije možete staviti i direktno na posudu za pregled pomoću mikroskopa. Izlijte kulturu na tanjurić i stavite je pod mikroskop. Pratite broj prisutnih bakterijskih stanica.
Korak 3. Uvjerite se da je doza koncentracije odgovarajuća
Ako ih ima previše, bakterije će se nakupiti jedna na drugu i možda ćete pogriješiti. Razrijedite kulturu miješanjem u više juhe. Ako ih ima premalo, rezultati izračuna neće biti točni. Procijedite juhu koristeći sistem za filtriranje.
Korak 4. Prebrojte bakterije
Posljednji korak je prebrojavanje bakterija jednu po jednu. Pogledajte kroz povećalo u komori za brojanje i zapišite broj bakterija koje vidite. Uporedite rezultate sa rezultatima drugih testova.
Metoda 2 od 3: Mjerenje suhe i vlažne mase
Korak 1. Provjerite imate li odgovarajuću opremu
Ova metoda koristi skupu opremu i puno vremena. Ako vaš laboratorij nema potrebnu opremu, bilo bi dobro upotrijebiti drugu metodu. Međutim, ako je vaša laboratorija dovoljno dobro opremljena, preporučujemo ovu metodu jer daje dosljednije rezultate. U ovoj metodi trebat će vam:
- Hidraulička gravitaciona pećnica
- Kontejner za vaganje od aluminija
- Set tikvica (laboratorijske boce)
- Centrifugalna mašina (centrifuga) ili laboratorijski sistem za filtriranje
Korak 2. Provjerite je li kultura u boci
Bundevi dodajte kulturu. U ovoj fazi kultura bi trebala biti čorba, iako će se kasnije ponovno odvojiti.
Korak 3. Osušite aluminijski spremnik za vaganje u laboratorijskoj pećnici
Umjesto toga, možete koristiti membranu od celuloznog acetata s filterom promjera 47 mm i veličine pora od 0,45 μm. Koji god spremnik za vaganje koristite, izvažite ga jer će ga kasnije trebati oduzeti pri vaganju bakterijskih stanica.
Korak 4. Promiješajte kulturu u tikvici dok se ne ujednači
Ćelija će prirodno potonuti zbog gravitacije i morat će se miješati kako bi se ravnomjerno rasporedila po tikvici. Na taj način možete imati više uzoraka.
Korak 5. Centrifugom odvojite bakterijske ćelije od bujona
Ovaj alat rotira tikvicu i brzo se uravnotežuje tako da ispušta juhu i ostavlja kulturu u tikvici.
Korak 6. Ostružite pastu sa bundeve i stavite je u posudu za vaganje
Izbacite juhu jer vam više ne treba. Međutim, nemojte se još uvijek riješiti bundeve jer će se i dalje koristiti.
Korak 7. Isperite centrifugalnu mašinu i ulijte vodu za ispiranje u posudu
Ispustite vodu za ispiranje u tikvicu na bakterijske ćelije kako biste dobili mokru težinu.
Korak 8. Pronađite suhu težinu
Za mjerenje suhe težine, posudu stavite u pećnicu i sušite na 100 ° C 6-24 sata prema uputama iz pećnice i/ili posude za vaganje koje se koriste. Pazite da temperatura nije previsoka kako bakterije ne bi izgorjele. Izvažite bakterije kad završite i ne zaboravite smanjiti rezultat za težinu posude za vaganje.
Metoda 3 od 3: Mjerenje zamućenosti
Korak 1. Pripremite potrebnu opremu
Trebat će vam izvor svjetlosti i spektrofotometar. Oboje se može nabaviti u prodavnicama laboratorijskih potrepština. Spektrofotometar bi trebao imati upute koje će vas voditi u korištenju instrumenta prema modelu koji imate. Cijena spektrofotometra je prilično pristupačna i laka za upotrebu pa bi mogla postati jedna od najčešće korištenih metoda za mjerenje rasta bakterija.
Korak 2. Osvijetlite uzorak
Prema Laymanovom izrazu, zamućenost je nivo zamućenosti uzorka. Morate dobiti broj mjerenja zamućenosti, koji se mjeri u NTU (Nefelometrijska jedinica za zamućenost). Ovaj alat treba kalibrirati prije nego što može točno izmjeriti uzorak.
Korak 3. Zapišite rezultate
Na zamućenost utječe broj bakterija u uzorku. Spektrofotometar će vam također reći postotak prijenosa (%T). Ova brojka će se povećati ako se zamućenost smanji. Uporedite rezultate s rezultatima drugih testova za mjerenje rasta bakterija.
Upozorenje
- Budući da imate posla s kolonijom bakterija, poduzmite mjere opreza noseći sigurnosnu opremu poput zaštitnih naočala i rukavica. Također je dobra ideja nositi masku, pogotovo ako ne znate vrstu bakterije koja se proučava.
- Poduzmite mjere opreza prije rukovanja bilo kojom vrstom bakterije, čak i bezopasnom. Prije početka provjerite jesu li sve otvorene rane na vašem tijelu potpuno prekrivene.
